腺相关病毒 (AAV) 是基因治疗中最广泛使用的传递/递转机制。近年来，基于AAV病毒所开发的基因疗法研发及临床试验注册数量也呈指数级增长，也需要AAV病毒生产工艺及产能的不断优化及扩展，从最早基于贴壁细胞工艺升级转换到以悬浮为主的200-2000L反应体系。

Mirus Bio成立于1996年，在核酸递送领域深耕多年，于2021年8月推出GMP级别TransIT-VirusGEN® GMP 转染试剂，支持AAV及LV从科研到GMP商业化生产。不同于传统基于单组分的转染试剂(如阳离子聚合物聚乙烯亚胺，PEI)，Mirus Bio将专利的多聚物及脂质技术进行多重组合，形成多功能性的转染方案，克服细胞递转过程中的多重阻碍，以实现更高效转染和更低细胞毒性，从而大幅度提升多种血清型AAV病毒生产载量。去年7月底Mirus上市RevIT™ AAV Enhancer，已证明在不同AAV血清型别中，可提高AAV病毒基因组滴度1.2-4.9倍，并且在一定程度改善了实心率。更重要的是，RevIT™ AAV Enhancer不仅可以搭配Mirus TransIT-VirusGEN® GMP 转染试剂，也适配于其他转染试(如PEI等)，使得AAV生产上游成本的进一步降低成为可能，进而降低了基因治疗单剂量成本。下图展示了国内客户前期测试反馈结果，测试包括了不同血清型别的质粒设计，适用于国内及国外品牌的转染试剂、细胞及培养基体系，实现了1.5-4倍以上的AAV病毒滴度提升。

RevIT Enhancer在国内客户不同AAV项目平台上的测试反馈结果

随着国内外客户项目及管线推进，已有越来越多的客户将TransIT-VirusGEN® 转染试剂以及RevIT™ AAV Enhancer从摇瓶阶段线性放大至200L-500L反应器，并且已应用到处于临床申报产品中。ReciBioPharm 与Mirus Bio合作， Chris Brown(工艺流程开发部门)在线上(链接)展示了TransIT-VirusGEN 和RevIT™ AAV Enhancer数据结果，并且比较了所有测试规模(摇瓶&反应器)，反馈病毒滴度放大效果非常好，并且实心率也保持相同水平，在 50 升的生物反应器中，也有着40%以上实心率。Chris Brown表示“选择用TransIT-VirusGEN 和RevIT™ AAV Enhancer产品，是基于我们以往的测试数据，允许最大限度地提高 AAV 产量。产量的提高，单个50 升生物反应器可生产更多剂量，从而降低单位剂量的成本。”

更多的，Bridgebio在poster中分享了基于AAV5型别，使用TransIT-VirusGEN® 转染试剂以及RevIT™ AAV Enhancer从摇瓶线性放大至200L反应体系(125mL摇瓶→2L → 10L → 200L)，病毒滴度和实心率数据结果(图1)。与原有工艺相比 (Process A：PEIPro转染 + Expi293细胞/培养基)，替换成TransIT-VirusGEN® 转染试剂后的工艺流程 (Process B：TransIT-VirusGEN® 转染试剂 + Expi293细胞 + BalanCD培养基；Process C：TransIT-VirusGEN® 转染试剂 + VP2.0细胞 + BalanCD培养基)均有着更高的病毒滴度(图2)和更低的宿主DNA和质粒DNA残留。

图1. 从125mL摇瓶线性放大至200L反应体系的病毒滴度和实心率数据结果

图2. 采用Mirus的工艺平台均有着更高的病毒滴度

Mirus Bio 并没有止步于此，并于2024年10月7日重磅推出 TransIT®-AAViator AAV转染试剂。继续沿用Mirus Bio 多聚物及脂质两组分的经典组合，不同的是应用逆向工程思维，基于现有RevIT™ AAV Enhancer，从Mirus Bio多聚物及脂质库中，分别筛选出更优化的脂质和聚合物配方。新推出的TransIT®-AAViator转染体系，进一步降低了 AAV工艺生产流程中所需质粒 DNA 和转染试剂使用量，最大限度地提高不同AAV血清型滴度和实心率，从而提升 AAV生产工艺的总体生产效率。整合TransIT®-AAViator的AAV病毒上游生产工艺，无需通过细胞密度而调整试剂和质粒DNA加入量，并且实现了单个生物反应器的生产剂量的成倍增加，大幅度降低了单位剂量的成本，为基于AAV 病毒的基因治疗开发提供了更优的解决方案。

产品详情

• 产品名称: TransIT®-AAViator Transfection System
• 上市日期：2024年10月7日
• 产品货号: MIR 73750 / MIR 73745
• 产品组分：TransIT®-AAViator转染试剂及RevIT™ AAV增强子

Mirus Bio AAV病毒生产相关转染试剂产品参数

* HDPE材质管/瓶

*只针对30 mL以及150 mL 规格试剂

**只针对150 mL 规格试剂

TransIT-AAViator®提升AAV生产效率&降低单剂量成本

生产剂量的成倍增加

随着AAV病毒滴度的提升，单个反应器所允许生产剂量也成倍的增加，从而大幅度降低单剂量成本。

减少生产所需批次

提高AAV病毒生产总产量，减少每次生产的所需批次数量或扩大生物反应器规模才可满足生产需求，缓解了由于产能不足等诸多限制。

减少质粒DNA用量

TransIT®-AAViator 转染系统，降低了至少一半质粒 DNA使用量 ，同时仍可保持高水平的滴度和实心率，进一步降低了批次生产成本。

加快工艺开发进程

TransIT®-AAViator 转染系统，只需较少实验优化，即可获得最佳结果，从而缩短了工艺开发时间，加快了产品上市速度。

TransIT®-AAViator有着更高滴度和实心率

使用不同的质粒设计(GFP基因-图3；RPE65 基因-图4)，平行比较TransIT®-AAViator 转染系统与“Poly F”(Polyplus FectoVIR® 病毒转染试剂)以及“Poly P” (Polyplus PEIpro®病毒转染试剂)。实验结果显示，在不同AAV血清型别中 (AAV5、8、9)，TransIT®-AAViator 转染系统有着更高的病毒滴度及实心率，当质粒设设计替换成治疗性基因(RPE65 基因)，病毒滴度及实心率相比于竞争品牌，其优势更加显著。

图3. 转染GFP基因质粒的AAV滴度

图4. 转染RPE65基因质粒的AAV滴度

TransIT®-AAViator降低质粒DNA用量

TransIT®-AAViator转染系统，在较低质粒 DNA 用量仍可得到高水平AAV病毒滴度及实心率（图5）。

图5. 实验使用TransIT® -AAViator转染试剂(试剂:DNA比例为1.25:1,vol:wt)，以 1:1:1 的质粒质量比转染 pAAV-WPRE-GFP (Aldevron), pAAV-Helper (Aldevron) 和 pAAV-RepCap (AAV9 Genemedi)三质粒。转染时加入RevIT AAV Enhancer（1 μl/mL），转染后 72 小时使用化学裂解法收获 AAV病毒。

TransIT-AAViator实验流程

Step 1:  转染前，需保证生长在培养基中的悬浮 HEK 293 细胞活率 > 95%。

Step 2: 转染时：建议细胞密度为 ~ 3 × 10E6 cells/mL，TransIT®- AAViator 试剂与DNA 加入比例为1:1 - 1.5:1，每 1 mL 培养基加入RevIT AAV Enhancer 0.5 - 1.5 μl；静止条件下孵育15-45 分钟，以便形成转染复合物，然后轻柔的加入细胞中。

Step 3: 转染后无需更换培养基，一般可在转染后 48-72 小时收获AAV病毒。

客户案例分享

最新线上webinar：Enhancing AAV Production: A Novel Transfection System for Cell and Gene Therapy Applications (链接)

演讲者信息：

Webinar内容一览：

通过该线上Webinar，可了解TransIT®-AAViator 转染系统，包括了开发初衷、数据性能对比及展示等。来自Affinia Therapeutics 高级工艺开发 Michael White， 强调了该转染系统的可扩展性和工作流程的易整合性，是想要优化上游工艺和增加整体成本效益的理想选择。

此外，Michael White分享了 Affinia Therapeutics AAV转染平台体系纳入TransIT®-AAViator 转染系统经验，强调该系统能够降低质粒DNA用量，同时也在不同规模中进行了测试(摇瓶-3L反应器)，可稳定的保持高水平滴度，从而大幅度提高了生产工艺的效率，同时降低了AAV病毒生产成本。

讨论重点包括：

• Affinia 比较了新一代转染系统TransIT®-AAViator与当前使用的平台工艺；
• Affinia 在将TransIT-AAViator® 与其他试剂性能进行比较中，如何优化使其性能显著优于其他转染试剂；
• 整合TransIT®-AAViator转染系统，相比于优化前实现了3 倍滴度提升及 70% 实心率。

小结

新一代专为优化AAV 生产工艺而推出的转染试剂: TransIT®-AAViator 转染系统：

• 与基于单个组分(如PEI)转染试剂不同，可显著的提高不同AAV 血清型别的滴度及实心率；
• 有着更低转染试剂及质粒DNA使用量需求，同时保持高水平的AAV滴度及实心率；
• 相比于竞争品牌(FectoVIR&PEIpro等)，有着更高基因组滴度及实心率，并且质粒设计为治疗基因，其优势更加显著。

相关产品信息及链接

Mirus成立于1995年，始终秉承着为基因递转提供优化方法及高效的工具。凭借超过 25 年转染领域的深根细作，获得了多项技术突破，已成为核酸递送领域的全球领导者和值得信赖的品牌。Mirus科学家团队不断突破转染技术的极限，推出了VirusGEN®转染试剂与RevIT™增强剂，进一步提升AAV/LV产量，助力推动生物治疗药物的降本增效，为CGT领域客户赋能。

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